關(guān)于動物血清的一些常見問題解答
在細胞培養(yǎng)中,血清是zui的重要組成部分。實驗操作中應(yīng)注意及處理方法:
保存血清:建議保存血清-5?!嬷?2O℃。但是,如果存放在4℃不要超過一個月。如果一次不能用完一瓶,建議您將血清無菌分裝到合適的滅菌容器中,然后放回冷凍。
解凍血清的方法:建議你把血清從冰箱里取出來,先放在2~8℃冰箱使之融化,然后在室溫下使之完全融化。但是,須注意的是,在融化過程中務(wù)必有規(guī)律地均勻搖晃。
血清解凍后發(fā)現(xiàn)絮狀沉淀物出現(xiàn),該怎么辦?
血清中沉淀物的原因有很多,但zui的常見原因是血清中脂蛋白的變性,血纖維蛋白(凝血蛋白之一)在血清解凍后也存在于血清中,這也是沉淀物的主要原因之一。然而,這些絮狀沉淀物不影響血清本身的質(zhì)量。
如果你想去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝在無菌離心管內(nèi),400g稍微離心一點,上清液可以加入培養(yǎng)基一起過濾。我們不建議你通過過濾來去除這些絮狀沉淀物,因為它們可能會阻塞你的過濾膜。
為什麼要熱滅活血清?
加熱可以滅活補充系統(tǒng)。激活補充劑參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。建議在免疫學(xué)研究中使用熱滅活血清,培養(yǎng)ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞。
有必要做熱滅活嗎?
實驗表明,對于大多數(shù)細胞來說,正確處理后的熱滅活血清是不必要的。經(jīng)過這種處理的血清只能稍微促進細胞的生長,或者完全沒有效果,甚至血清質(zhì)量通常受到高溫處理的影響,導(dǎo)致細胞生長速度降低。然而,經(jīng)過熱處理的血清會明顯增加沉淀物的形成。這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,如“小黑點”,往往會讓研究人員誤以為血清受到污染,將血清放在37處℃在環(huán)境中,這種沉淀物會增加,使研究人員誤以為是微生物的分裂擴增。
所以我們建議你,如果沒有必要,你就不需要做熱處理了。這樣,不僅可以節(jié)省你寶貴的時間,還可以保證血清的質(zhì)量!
為什麼存放在冰箱里的胎牛血清會出現(xiàn)沉淀?
胎兒血清未預(yù)老化,儲存在2-8℃當時,血清中的各種蛋白質(zhì)和脂蛋白(如凝聚素、纖維蛋白原、玻璃粘連蛋白等)可能會聚集,形成沉淀或可見的渾濁。這不應(yīng)該影響血清質(zhì)量。建議-20℃儲存胎牛血清,避免反復(fù)凍融。
怎樣避免產(chǎn)生沉淀物?
解凍血清時,請按照建議的逐步解凍方法(-20)℃至4℃在室溫下),如果血清解凍時溫度變化過大(例如-20℃至37℃),實驗表明,沉淀物很容易產(chǎn)生。
解凍血清時,請隨時搖勻,使溫度和成分均勻,減少沉淀的發(fā)生。
不要把血清放在37℃太久。若在37℃放置時間過長,血清就會變得渾濁,血清中的許多不穩(wěn)定成分也會受到損害,從而影響血清的質(zhì)量。
血熱滅活很容易導(dǎo)致沉淀物增多,如果沒有必要,就不需要這樣做了。
如果需要進行血清熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過長或搖晃不均勻,都會導(dǎo)致沉淀物增多。