動(dòng)物血清廠家告訴您樣本的用途
動(dòng)物血清:將收集在血清分離管中的全血標(biāo)本放置在室溫下.5-2小時(shí)或4℃過夜,然后1000×g離心20分鐘,取上清,或?qū)⑸锨宄?20℃或-80℃但要避免反復(fù)凍融。
血漿:用EDTA或者肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,采集后30分鐘內(nèi)2-8℃1000×g離心15分鐘,取上清檢測,或?qū)⑸锨宸旁?20℃或-80℃但要避免反復(fù)凍融。
組織勻漿:預(yù)冷PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(均勻漿液中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測量結(jié)果),稱重后切割組織。切割組織與相應(yīng)體積PBS(一般按1:9的重量體積比,如1g組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整具體體積并做好記錄。PBS加入蛋白酶抑制劑入蛋白酶抑制劑),在冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,均勻漿可以超聲破碎或反復(fù)凍融。最后,將均勻漿液加入5萬×g離心5~10分鐘,取上清檢測,或?qū)⑸锨宸旁?20分鐘℃或-80℃但要避免反復(fù)凍融。
細(xì)胞裂解液:吸棄培養(yǎng)液PBS(0.01M,pH7.4)再次清洗細(xì)胞。用細(xì)胞刮去細(xì)胞(胰酶和胰酶不能使用)EDTA處理),加2-5mLPBS(0.01M,pH7.4)。懸浮細(xì)胞可以省略。收集細(xì)胞懸液,4℃1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷PBS潤洗3次。加入適量的預(yù)冷PBS或非變性細(xì)胞裂解液(臨用前添加蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞,通常6孔板一孔的細(xì)胞量需要150-250μLPBS重懸。將樣品放入-20℃或-80℃,冷凍樣品,然后在室溫下解凍樣品,反復(fù)冷凍3次,使細(xì)胞完全分解,或超聲破碎樣品,以達(dá)到裂解的目的?!?0000×g離心10min,去除細(xì)胞碎片,取上清檢測,或?qū)⑸锨宸旁?20℃或-80℃但要避免反復(fù)凍融。
上清細(xì)胞培養(yǎng)物或其他生物標(biāo)本,請1萬×g離心20分鐘,取上清檢測,或?qū)⑸锨宸旁?20℃或-80℃但要避免反復(fù)凍融。
樣品的保存和穩(wěn)定性:
樣本在2-8℃72h,在-20℃或-80℃可儲(chǔ)存6個(gè)月以上。樣品收集后,不是一次檢測,請按一次用量分裝冷凍,避免反復(fù)冷凍。