胎牛血清的正確保存方式
胎牛血清自上市以來一直存在爭議。從制造商、價格、鑒定到產(chǎn)品質(zhì)量,如何正確保存產(chǎn)品都是一些大問題。將帶領(lǐng)您學(xué)習(xí)如何正確使用和保存血清。
標(biāo)準(zhǔn)血清的鑒別方法:
血清凝固沉淀的淡黃色透明液體,如從血管中提取血液,放入試管中,無抗凝劑,血液迅速凝固,形成凍結(jié)。凝血塊收縮,周圍沉淀的淡黃色透明液體為血清,凝血后也可通過離心獲得。在凝血過程中,纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為維蛋白塊,因此血清中沒有纖維蛋白原,這與血漿不同。在凝血反應(yīng)中,血小板釋放出許多物質(zhì),凝血因子也發(fā)生了變化。這些成分留在血清中,并繼續(xù)改變,如凝血酶原轉(zhuǎn)化為凝血酶,隨著血清儲存時間的逐漸減少甚至消失。這些也是與血漿的區(qū)別。但大量不參與凝血反應(yīng)的物質(zhì)與血漿基本相同。為了避免抗凝劑的干擾,血液中許多化學(xué)成分的分析都以血清為樣本。
胎牛血清作用:
胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中大量zui的天然培養(yǎng)基,富含細(xì)胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì),常用于動物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有重要的功能。
血清保存要點:
1.需要長期保存的血清務(wù)必儲存在-20℃-70℃的低溫冰箱中。4℃冰箱的保存時間不得超過1個月。因為血清結(jié)冰時體積會增加10%左右,所以在冷凍在低溫冰箱之前,血清務(wù)必保留一定的體積空間,否則容易污染或玻璃瓶凍裂。
2.熱滅活是指56℃,30分鐘加熱完全解凍的血清,加熱過程務(wù)必均勻搖晃,熱處理的目的是滅活血清中的補充成分。除非必要,否則一般不建議進行這種熱處理,因為熱處理會導(dǎo)致血清沉淀顯著增加,但也會影響血清的質(zhì)量。補充劑的參與反應(yīng)包括:細(xì)胞毒性、平滑肌細(xì)胞收縮、肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺,增強吞噬作用,促進淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的化學(xué)趨化和活化。
3.瓶裝血清解凍應(yīng)逐步解凍:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清在4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待完全溶解后重新包裝。在溶解過程中,需要輕輕搖晃均勻(小心不要引起氣泡),使溫度和成分均勻,減少沉淀的發(fā)生。不要將血清從-20℃直接解凍到37℃,因為溫度變化太大,容易導(dǎo)致蛋白質(zhì)凝結(jié)和沉淀。
4.一般廠家提供的血清無菌,無需過濾消毒。如果發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,可以將血清加入培養(yǎng)液一起過濾,不要直接過濾血清。
5.血清中的沉淀物和絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性和解凍后血清中的纖維蛋白引起的,不會影響血清本身的質(zhì)量。離心3000rpm可以在5分鐘內(nèi)去除,也可以不用處理。顯微鏡下的“小黑點”:經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成將顯著增加。一些沉淀物在顯微鏡下被觀察為“小黑點”,通常被誤認(rèn)為是血清污染。一般來說,這個小黑點不會影響細(xì)胞的生長,但如果懷疑血清的質(zhì)量,應(yīng)立即停止使用,以更換另一批血清。
6.不要把血清放在37℃太久,否則血清會變得渾濁,血清中的有效成分會破裂,影響血清質(zhì)量的保存/運輸:-5°C~-20°C。